1. 取6個Ultra-clear SW28離心管,用70%乙醇消毒后,放在超凈工作臺中打開紫外燈繼續(xù)消毒30分鐘。
2. 每個Ultra-clear SW28離心管中加入約32ml的預先處理的病毒上清液。
3. 取一支10ml的移液管,吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。將移液管一直插入到離心管的底部,緩慢將蔗糖溶液打出4 ml。同樣地,將剩下8 ml的蔗糖溶液分別加入到另兩個離心管中。另取一支干凈的移液管,對剩下3管進行同樣處理。
4. 用PBS調整各管的重量,使對應的離心管之間的重量相差不超過0.1g。
5. 按次序將所有6個離心管放入超速離心機轉頭中。
6. 4℃,25,000 rpm. (82,700g) 離心2小時。
7. 小心將管子從轉頭中取出。倒掉上清,將離心管倒扣在紙巾上放置10分鐘使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底應當有可見的沉淀。
8. 每管中加入100ml 不含鈣和鎂的PBS洗下沉淀。
9. 將SW28超速離心管插入到50ml錐底離心管中,蓋上蓋子。
10. 在4℃溶解2小時,每隔20分鐘輕輕震蕩。
11. 4℃,500g離心1分鐘,使溶液集中于管底。
12. 用200μl 移液器輕柔吹打使沉淀重懸。避免產(chǎn)生泡沫。將所有管中的液體集中到一個SW28離心管中。
13. 集中后的病毒懸液分裝成50μl 每份,保存在成品管中。用碎干冰速凍后儲存在-80 ℃。