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禽流感病毒通用熒光RT- PCR檢測(cè)的操作方法，適用于活禽及其產(chǎn)品中禽流感病毒的檢驗(yàn)。

樣品采集
活禽取咽喉拭子和泄殖腔拭子，采集方法如下:取咽喉拭子時(shí)將拭子深人喉頭口及上顎裂來(lái)回刮3次一5次取咽喉分泌液;取泄殖腔拭子時(shí)將拭子深人泄殖腔轉(zhuǎn)一圈并沾取少量糞便;將拭子一并放人盛有1.0mLPBS的1.5mL Eppendorf管中，加蓋、編號(hào)。

肌肉或組織臟器?待檢樣品裝人一次性塑料袋或其他滅菌容器，編號(hào)，送實(shí)驗(yàn)室。

血清、血漿?用無(wú)菌注射器直接吸取至無(wú)菌印pendorf管中，編號(hào)備用。

樣品貯運(yùn)
樣品采集后，放人密閉的塑料袋內(nèi)(一個(gè)采樣點(diǎn)的樣品，放一個(gè)塑料袋)，于保溫箱中加冰、密封，送實(shí)驗(yàn)室。

樣品制備
咽喉、泄殖腔拭子樣品在混勻器上充分混合后，用高壓滅菌鑷子將拭子中的液體擠出，室溫放 置30min,取上清液轉(zhuǎn)人無(wú)菌的1.5m L印pendorf管中，編號(hào)備用樣品存放制備的樣本在2 `C -8`C條件下保存應(yīng)不超過(guò)24h,若需長(zhǎng)期保存應(yīng)置一70`C以下，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（凍融不超過(guò)三次)。

試劑準(zhǔn)備

在反應(yīng)混合物配制區(qū)進(jìn)行從試劑盒中取出相應(yīng)的熒光RT-PCR反應(yīng)液,Taq酶，在室溫下融化后，2000r/min低速離心機(jī)離心5s。設(shè)所需熒光RT-PCR檢測(cè)總數(shù)為n,其中n為被檢樣品、為陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照的和。