一、 實(shí)驗(yàn)原理:
帶點(diǎn)粒子在電場中移動的現(xiàn)象為電泳。通過電泳技術(shù)對蛋白的提取,在醋酸纖維素薄膜分離出血清蛋白中的各種蛋白。
二、 實(shí)驗(yàn)步驟:
1、鹽析: 取小牛血清0.5毫升+PBS液0.5毫升+飽和硫酸銨2.3毫升,充分混勻,靜止20分鐘,臺式低速離心機(jī)2500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。
2、透析:取玻璃紙一張,折成袋形,將離心后的上清液倒入袋內(nèi),用線扎緊上口(注意要留有空隙),放入裝有自來水的小燒杯中透析,要不斷振動,每隔2分鐘換一次水,共換水15次。
3、電泳:
1)點(diǎn)樣
取一張膜條,將膜條無光澤面向下,放入培養(yǎng)皿中得巴比妥緩沖液中使膜條侵透,取出,用玻璃紙吸干,以薄膜的無光澤面距一端1.5厘米處做點(diǎn)樣線,將牛血清樣品與待測的牛血清白蛋白溶液分別用點(diǎn)樣器在同一張薄膜的點(diǎn)樣線處不同位置點(diǎn)樣。
2)電泳
將點(diǎn)樣后的膜條置于電泳槽架上,放置時無光澤面向下,點(diǎn)樣端置于陰極,平衡5分鐘,開電源160伏60分鐘,關(guān)閉電源后用鑷子將膜條取出。
3)染色
將膜條直接浸于盛有氨基黑10B的染料中,染2分鐘取出,立即浸于漂洗液中,分別在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5分鐘,直至背景漂洗干凈為止。
4.觀察結(jié)果
比較樣品與待測液中白蛋白在薄膜上的電泳結(jié)果。
? 實(shí)驗(yàn)儀器:離心管、離心機(jī)、試管、玻璃紙、燒杯、滴管、玻璃棒、電泳儀、醋酸纖維素薄膜、分光光度計。