一、離心機分離法
分離葉肉細胞 [儀器與用具] 組織搗碎機一臺(或研缽一套); 低速臺式離心機1臺; 100目尼龍紗布30cm×30cm 1塊; 100ml量筒1個; 100ml燒杯2個; 200ml燒杯1個; 冰瓶1個; 離心管、吸管若干。
[試 劑] STN液(蔗糖0.4mol·L-1，Tricine 20mmol·L-1 pH 7.8， NaCl 10mmol·L-1)。將137g 蔗糖、3.58g Tricine(三羥甲基甘氨酸)、0.58g NaCl溶于800ml左右水中，用NaOH溶液調至pH 7.8，加水至1000ml。STN液置0-4℃冰箱中備用。
[方 法]
1．選用山芋、大豆等植物的嫩葉50g左右，洗凈，去葉脈，剪成2mm左右寬的葉條，放入搗碎機中，加入150ml左右的冷STN液，以10000轉/分，快速搗碎15秒，或將10g左右葉片剪碎，放入研缽中，加入50ml冷STN液，研磨1分鐘。
2．先將勻漿用100目的單層尼龍紗布過濾，將濾液用臺式離心機低速(500轉/min)離心30秒。去上層液，用少量STN液懸浮沉淀，懸浮液即為葉肉細胞。如果第一次離心后，沉淀中細胞碎片較多,可再懸浮離心一次。提取過程最好在4℃左右溫度下進行。
3. 細胞懸浮液放冰瓶中備用。
二、酶解法
分離葉肉細胞 [儀器與用具] 抽真空裝置1套或大針筒1套; 恒溫水浴(最好用恒溫振蕩器)1臺; 感量0.01g天平1臺; 離心機1臺; 100和50ml燒杯各2個; 鑷子1把; 剪刀1把; 100目尼龍紗布30cm×30cm 1塊; 刀片一把; 載玻片一塊。
[試 劑] 分離介質：糖醇0.4mol·L-1 (稱7.3g山梨醇或甘露醇定溶于100ml水中)，，離析酶(Macerozyme R-10)3％，葡聚糖硫酸鉀0.4％與聚乙烯吡咯烷酮2％，pH5.6~5.8，稱0.3g離析酶、0.04g葡聚糖硫酸鉀、0.2g聚乙烯吡咯烷酮溶于10ml 0.4mol·L-1山梨甘露醇溶液中，滴加HCl調至pH 5.6~5.8。 懸浮介質：STN液（配法同上）。
[方 法]
1． 取蠶豆等嫩葉2g左右，用鑷子撕去下表皮。不能撕表皮的可用剪刀剪，或用刀片切成2mm寬碎條。放燒杯中，加20ml分離介質，用抽真空裝置或針筒真空滲入15秒，使分離介質滲入葉內。
2． 將酶解體系放入25~30℃水浴中，每隔2-3分鐘振動一次，酶解30分鐘左右,直至肉眼可見溶液中有較多的葉肉細胞沉淀為止。
3． 用100目尼龍紗布過濾酶解介質，將濾液500轉/min離心30秒，舍去上層液，用10ml STN液懸浮沉淀，再離心一次，去上層液，沉淀中加入2mlSTN液稀釋，即得到葉肉細胞懸浮液，細胞懸浮液置冰瓶中備用。
三、細胞活力的檢查
[儀器與用具] 顯微鏡1臺；氧電極測定光合放氧裝置(見實驗23)1套；吸管3支；5mL、1mL移液管各2支；0.1mL微量進樣器；載玻片與蓋玻片若干等。
[試 劑] 0.1％酚藏紅花染液； 光合放氧測定介質(Tricine 50mmol L-1 pH7.6，NaHCO3 20mmol L-1，蔗糖0.4mol L-1) 稱0.9gTricine、10.3g蔗糖、0.17gNaHCO3溶于80mL水中，用稀NaOH調至pH7.6，加水至100mL。
[方 法]
1、 檢細胞形態(tài)： 葉片中葉肉細胞的大部分是柵欄細胞和海綿細胞，多數(shù)呈花生形?；畹娜~肉細胞中的葉綠體排列規(guī)則，分布均勻，在高倍鏡下能看到細胞器在原生質體中移動。而受傷和死細胞，細胞收縮，葉綠體排列混亂，甚至解體，細胞內顆粒作無規(guī)則的布朗運動。
2、 色檢查： 將0.1％酚藏紅花染液同細胞懸浮液混合，幾分鐘后鏡檢。死細胞被染上紅色，而活細胞不被染色。
3、合放氧活性測定： 在氧電極反應杯中加5份光合放氧測定介質，1份細胞懸浮液，照光，觀察是否有放氧反應。
注意事項
1. 不是所有植物的葉片都能用機械法分離出完整的葉肉細胞的，機械法僅適用于山芋、大豆、花生、蘋果、槐樹等植物葉片。分離細胞的活性還與葉齡有關，如分離具有高活性的大豆葉肉細胞,應采集倒2、倒3的嫩葉作為材料。
2. 離體的葉肉細胞的活性隨離體時間延長而降低。
掃我聯(lián)系