黃曲霉毒素主要存在于谷物、堅(jiān)果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些與人類血液，動(dòng)物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。霉菌的生長(zhǎng)并不一定表明黃曲毒素的存在，因?yàn)辄S曲毒素只有在濕度、溫度適合及通風(fēng)良好才會(huì)生成。黃曲霉素B類具有藍(lán)色熒光，G類具有綠色熒光。除了蔬菜中常見的(B1,B2,G1,G2)，還有存在喂食了有毒飼料的奶牛的牛奶中的黃曲霉素M，其中毒性最高的M的代謝物為4－羥基化的產(chǎn)物Bs.黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產(chǎn)物，也是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)。其危害巨大，人類日常消費(fèi)食品中如牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。黃曲霉毒素的危害性在于對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時(shí)，可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。毒性是砒霜的100倍其實(shí)主要是指黃曲霉毒素比砒霜毒。
目前來講，Aflatoxin M1的檢測(cè)方法有高效液相色譜法(HPLC)，酶聯(lián)免疫檢測(cè)法等。液相色譜法可以精確的檢測(cè)奶制品中黃曲霉毒素的微小含量。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。
高效液相色譜法：根據(jù)國(guó)標(biāo)《GB 5413.37—2010》食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測(cè)定
實(shí)驗(yàn)用前處理：實(shí)驗(yàn)儀器和好耗材包括：恒溫水浴鍋 溶劑過濾器(帶真空泵)1000ml 高速勻質(zhì)器 黃曲霉毒素免疫M(jìn)1親和柱玻璃纖維濾紙 玻璃注射器 無熒光特性玻璃試管 空氣壓力泵 超聲波清洗機(jī) 定量濾紙 量筒 樣品瓶 容量瓶 移液器或移液管
實(shí)驗(yàn)用試劑：色譜乙腈 色譜甲醇 氫氧化鈉 石油醚 超純水或去離子水等等
HPLC條件： 高效液相色譜儀 色譜柱 C18柱，150*4.6mm，5um 流動(dòng)相 乙腈－水（25：75） 熒光檢測(cè)器： 激發(fā)波長(zhǎng)365nm，發(fā)射波長(zhǎng)435nm； 柱 溫 室溫 流速 1.0ml/min 進(jìn)樣量 20ul 出峰時(shí)間 10分鐘左右
樣品取樣：真菌毒素分析的最大誤差來源是樣品的收集和取樣過程，所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。
樣品前處理：不同樣品
牛奶 水浴加熱至40度，離心用上清液過柱凈化；
乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品：稱取適量奶粉樣品，用于蒸餾水中，混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；
發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)：稱取適量奶粉樣品，用于蒸餾水中，調(diào)節(jié)PH值至微堿性，高速均質(zhì)器勻漿，水浴加熱后離心，取上清液混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；
干酪：稱取適量切細(xì)或粉碎，過篩用加純水溶解，高速均質(zhì)器勻漿，超聲提取后收集上清液，然后用石油醚進(jìn)行兩次萃取，然后用適宜的有機(jī)溶液萃取，取若干上清液過柱凈化
奶粉樣品，用于蒸餾水溶解中，調(diào)節(jié)PH值至微堿性，水浴加熱后離心，取上清液混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；
奶油：稱取適量加甲醇水溶解，震蕩后分液漏斗取下層溶液，蒸干后溶于水用于過柱凈化。
免疫柱凈化步驟：完全符合GB/T 18980-2003
1、取出免疫親和層析柱, 恢復(fù)至室溫，將上方塞子取出斜剪斷，再插回親和柱上。
2、將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取清澈液注入玻璃注射器；
3、將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
4、更換玻璃注射器與親和柱連接，在注射器中加入10ml水，調(diào)節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。
5、準(zhǔn)確加入4mL色譜級(jí)乙腈洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)。
注：收集管中的洗脫液即為純化后的樣品，可直接用ELISA,熒光和高效液相等方法檢測(cè)。 HPLC 檢測(cè)需要儀器與耗材 產(chǎn)品名稱 說明 黃曲霉毒素M1固體標(biāo)準(zhǔn)品 參比對(duì)照使用 黃曲霉毒素M1液體標(biāo)準(zhǔn)品 濃度0.5ug/ml, 溶于乙腈 PriboFast 黃曲霉素M1免疫親和柱 用于 樣品前處理柱 分析黃曲霉素 PriboFast泵流操作架（8位） 用于免疫親和柱凈化樣品處理，方便控制流速 黃曲霉毒素檢測(cè)專用玻璃纖維濾紙 用于去除HPLC檢測(cè)時(shí)部分雜峰，有效提高靈敏度。110，1.5um 不銹鋼均質(zhì)器 高速勻漿樣品，有效提高萃取效率 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀-超聲波發(fā)生器等配套設(shè)備
酶聯(lián)免疫檢測(cè)法：符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)酶聯(lián)免疫檢測(cè)法采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA，在微孔板上預(yù)包被黃曲霉毒素B1抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品溶液）及辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的黃曲霉毒素M1與預(yù)包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素M1抗體。未結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時(shí)被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負(fù)相關(guān)。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得出相應(yīng)殘留物黃曲霉毒素M1的含量。
樣品處理牛奶 直接離心取上清液用于檢測(cè)奶粉及其他固狀奶制品：需要溶解于去離子水中，乳脂離心機(jī)離心取上清液用于檢測(cè)試劑盒檢測(cè)時(shí)間：30分鐘＋30分鐘交叉反應(yīng)率： Aflatoxin M1 100% Aflatoxin B1 8% Aflatoxin B2 10% Aflatoxin G1 7% Aflatoxin G2 5% ELISA 方法檢測(cè)需要： 說明 PriboFast 黃曲霉毒素M1酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒 96T 檢測(cè)范圍 (0.1 ppb －8.1ppb) 移液器（彩色） 多個(gè)量程：0.5-10; 20-200; 5-50; 1000-5000ul 八道半支滅菌移液器 量程： 5-50ul; 50-300ul 酶標(biāo)儀等 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)儀器， PriboFast試劑盒采用直接競(jìng)爭(zhēng)法，檢測(cè)時(shí)間短，步驟簡(jiǎn)單，性能穩(wěn)定，檢測(cè)限符合國(guó)標(biāo)要求。
對(duì)分析人員要求：化學(xué)分析儀器及其相關(guān)專業(yè)或有高效液相色譜儀操作經(jīng)驗(yàn)的人員均可很快掌握黃曲霉毒素M1檢測(cè)技術(shù)。
掃我聯(lián)系