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取培養(yǎng)7d 的藻細(xì)胞培養(yǎng)液利用臺(tái)式低速離心機(jī)采用離心力4500g 離心10min,細(xì)胞沉淀重懸在新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)

基中充分洗滌,然后4500g 離心10min,除去一些細(xì)胞外的粘稠物.

將離心得到的細(xì)胞沉淀重懸在冰預(yù)冷的15mL 分離緩沖液( 1mol/ L Sorbitol,50mmol/ L Hepes,2mmol/ L EDTA,1mmol/ L MnCl2,1mmol/ LMgCl2,0.5% BSA,0.1 mol/ L DTT,用KOH 調(diào)節(jié)到pH 7.5) 中.

將15mL 重懸細(xì)胞液進(jìn)行冰浴超聲波破碎,超聲波功率200W,共作用64s,每次作用時(shí)間8s,間隔時(shí)間9.9s.然后4℃2000g 離心10min,沉淀重懸在3mL 的分離緩沖液中,作為葉綠體粗提液.

將葉綠體粗提液加在蔗糖密度梯度( 30%/ 45%/ 59% ,30mL) 上,4℃40000g 離心30min,吸取45%和59% 之間的條帶( 約5mL) ,用3 倍體積的清洗緩沖液( 1 mol/ L Sorbitol,25mmol/ L Hepes,用KOH 調(diào)節(jié)到pH 7.5) 清洗收集物,4℃2000g 離心10min,沉淀即為完整的葉綠體.